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β-伴大豆球蛋白的提取純化及多克隆抗體制備
來源:導(dǎo)入 閱讀量: 372 發(fā)表時間: 2025-06-23
作者: 錢周澤,李妍,夏琳枝,梁子儀,安曉敏,郭云霞,郝慶紅
關(guān)鍵詞: β-伴大豆球蛋白;提取純化;多克隆抗體;酶聯(lián)免疫吸附試驗
摘要:

本研究通過堿溶酸沉法、切向流過濾(tangential flow filtration,TFF)系統(tǒng)對β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin,β-CG)進(jìn)行分離純化,并制備兔抗β-CG多克隆抗體,通過間接酶聯(lián)免疫吸附和免疫印跡檢測抗體效價及其特異性。采用棋盤滴定法明確最佳抗原包被濃度和抗體稀釋度。結(jié)果顯示,經(jīng)TFF純化后,β-CG(α’、α和β亞基)占比96.70%,酸性亞基占比3.30%,2S白蛋白和抑制蛋白被去除。自制兔抗β-CG多克隆抗體可有效結(jié)合純化后的β-CG,抗體特異性良好。最終確定的最佳抗原包被質(zhì)量濃度為1 μg/mL,最佳抗體稀釋度為1∶9 000(V/V)。綜上,本研究不僅可為β-CG的提取與純化提供新的思路,同時也可為今后研究低致敏性β-CG的作用機(jī)制、開發(fā)低致敏性大豆蛋白產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。

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