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黃曲霉毒素B1核酸適配體篩選和檢測方法的建立
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 338 發(fā)表時間: 2021-01-08
作者: 張敏,張先舟,李聰,高浩,劉健慧,田益玲,馬雯,李英軍,檀建新
關(guān)鍵詞: 黃曲霉毒素B1;核酸適配體;指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù);比色檢測;納米金
摘要:

建立一種高靈敏的快速檢測黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的方法。基于氧化石墨烯(graphene oxide,GO)通過π-π共軛吸附單鏈寡核苷酸(single-strand DNA,ssDNA),對已結(jié)合靶標的ssDNA吸附能力較弱的特性,設(shè)計針對AFB1核酸適配體的篩選方案。經(jīng)過10 輪篩選,共獲得45 條ssDNA序列。挑選具有代表性的6 條序列進行親和力分析實驗,其解離常數(shù)Kd分別為16.29、27.88、18.54、23.11、47.94、22.31 nmol/L。選用親和力較高的AFB-5、AFB-8進行特異性實驗,結(jié)果顯示所篩選的適配體能特異性吸附AFB1。最后利用適配體AFB-8作為識別元件建立了基于納米金比色檢測AFB1的方法。在優(yōu)化的檢測條件下,AFB1質(zhì)量濃度與A520 nm值有良好的線性關(guān)系,其回歸方程為y=-0.007 09x+0.461 42(R2=0.997 9),線性范圍為0.025~10 ng/mL,檢出限為0.025 ng/mL。通過特異性實驗和對大米樣品加標回收實驗,加標回收率為83.36%~105.74%,證明本方法的可行性。

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