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基于單核苷酸多態(tài)性位點的多重實時熒光定量聚合酶鏈式反應法鑒別當雄高山牦牛肉
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 323 發(fā)表時間: 2021-01-08
作者: 劉睿茜,其美次仁,李家鵬,韋憶萱,李金春,王守偉
關(guān)鍵詞: 當雄高山牦牛;品種鑒別;單核苷酸多態(tài)性位點;多重實時熒光定量聚合酶鏈式反應;熔解曲線
摘要:

通過比對5個不同地區(qū)牦牛線粒體基因的差異,篩選出用于鑒定當雄高山牦牛的11 個單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位點,將這些SNP位點作為引物3′端,同時引入引物堿基錯配理念,設(shè)計出8 對特異性引物,構(gòu)建出2 個三重和1 個二重實時熒光定量聚合酶鏈式反應(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)體系,建立一種基于SNP位點和多重RT-PCR技術(shù)鑒別當雄高山牦牛肉的方法。結(jié)果表明:該方法特異性較好、簡便快捷、結(jié)果直觀可靠,能夠有效鑒別當雄高山牦牛肉;方法中3 個RT-PCR反應體系擴增產(chǎn)物對應的熔解溫度(melting temperature,Tm)范圍分別為反應體系A(chǔ):73.1~75.2、76.0~77.3、79.0~80.0 ℃,反應體系B:69.5~72.8、75.0~77.9、78.5~80.0 ℃,反應體系C:76.1~78.1、79.5~80.7 ℃;根據(jù)3 個反應體系中熔解曲線峰的有無以及Tm是否符合取值范圍來判定樣品是否為當雄高山牦牛肉;市售樣品測定結(jié)果表明,該方法可用于實際樣品中當雄高山牦牛肉的快速鑒別。

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