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基于RT-ddPCR技術(shù)的食品中諾如病毒定量檢測
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 417 發(fā)表時間: 2023-01-03
作者: 徐蕾蕊,李丹,汪琦,馬丹,魏詠新,魏海燕,趙曉娟,張西萌,曾靜
關(guān)鍵詞: 逆轉(zhuǎn)錄微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);諾如病毒;MS2噬菌體;回收率
摘要:

目的:構(gòu)建基于逆轉(zhuǎn)錄微滴式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)技術(shù)的食品中諾如病毒(norovirus,NoV)定量檢測方法。方法:篩選引物探針,建立并優(yōu)化GI、GII型NoV和MS2噬菌體一步法RT-ddPCR檢測體系,確定特異性。利用NoV RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和MS2噬菌體RNA確認(rèn)RT-ddPCR檢測體系的定量限、準(zhǔn)確度和重復(fù)性。制備人工陽性樣品,分析MS2噬菌體對定量結(jié)果的影響。結(jié)果:3 個RT-ddPCR檢測體系具有良好的特異性、準(zhǔn)確度和重復(fù)性,NoV RT-ddPCR檢測體系的定量限包含104~100 拷貝/μL 5 個數(shù)量級,MS2噬菌體RT-ddPCR檢測體系定量限與NoV相當(dāng),添加與不添加MS2噬菌體的人工陽性樣品的定量結(jié)果無顯著差異(P≥0.05)。結(jié)論:NoV RT-ddPCR檢測體系可準(zhǔn)確定量NoV RNA,MS2噬菌體不影響定量結(jié)果,可作為過程控制的模式病毒被添加到食品中,指示回收率,計算食品中NoV實(shí)際載量。

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