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基于G-四鏈體的PCR-RCA雙重擴增技術(shù)檢測沙門氏菌
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 438 發(fā)表時間: 2022-10-24
作者: 劉健慧,張先舟,張?zhí)N哲,李蘭茹,王紅靜,高潔,耿鳳珍,檀建新
關(guān)鍵詞: G-四鏈體;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);滾環(huán)擴增技術(shù);沙門氏菌;熒光信號檢測
摘要:

將聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)與滾環(huán)擴增技術(shù)(rolling circle amplification,RCA)聯(lián)用,并把G-四鏈體互補序列嵌入到RCA擴增所需的啞鈴環(huán)狀模板上,通過PCR和RCA的雙重擴增及特異性結(jié)合G-四鏈體的硫黃素T熒光信號增強的作用,達到基于G-四鏈體的PCR-RCA技術(shù)檢測沙門氏菌(Salmonella)的目的。在優(yōu)化的檢測體系下,確定了沙門氏菌基因組DNA濃度對數(shù)與486 nm波長處的熒光信號強度具有良好的線性關(guān)系,回歸方程為y=2.101x+2.872 3(R2=0.992 5),線性范圍為17 fg/μL~1.7 ng/μL。根據(jù)實驗的特異性分析,表明此方法適用于沙門氏菌屬的檢測,對人工污染沙門氏菌牛奶樣品進行檢測,檢出限為4.28 CFU/mL。該方法具有特異性強、靈敏度高、檢出限低等優(yōu)點,為實現(xiàn)食源性致病菌的快速檢測提供新的方法。

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